补骨脂素加长波紫外线诱导HL-60细胞凋亡时Caspase8、Caspase3蛋白的变化
补骨脂素加长波紫外线诱导HL-60细胞凋亡时Caspase8、Caspase3蛋白的变化陈楠楠，尤婷玉，向阳，张德杰，黄世林(中国人民解放军第21O医院中医血液科，辽宁大连l16021)摘要： 目的 研究补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病HL-60细胞凋亡时Caspase8、Caspa se3蛋白的变化。方法用不同浓度的中药补骨脂中提取的P80和／或不同照射时间、波长为360 nm的UVA作用于HL一60细胞，检测细胞凋亡率，在电镜下观察细胞超微结构改变及Ca spa se8、Ca spase3蛋白的表达，用多因素方差分析法对定量资料进行统计分析。结果PS0、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加，上调Caspase8、Ca spase3蛋白的表达，PUVA的作用显著强于前两者；PUVA处理后的HL一60细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变结论PUVA在诱导HL-60细胞凋亡的过程中激活了Ca spase8、Ca spa se3。关键词：补骨脂素；PUVA；HL一60细胞；凋亡；Ca spa se8；Caspase3
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：1005．5304(2008)11-0027．03
诱导细胞凋亡是化疗药物杀伤白血病细胞的主要途径。Caspases(Cysteinyl asparate specific proteinase)是一种特异性蛋白酶，以执行细胞凋亡而受到广泛关注 。Caspase8和Caspase3均属于该家族的成员，在凋亡过程中发挥重要作用，其中前者被认为是凋亡的启动者，后者被认为是凋亡的执行者 。PUVA 是补骨脂素(psoralen，PS0)加长波紫外线(U]traviolet A，UVA)光化学疗法，我们从中药补骨脂中提取了PS0，研究PUVA在诱导人类白血病细胞HL一6O凋亡时Caspase8、Caspase3蛋白的变化，以进一步了解PUVA诱导白血病细胞凋亡的作用机制。
既往的研究证实，PUVA对人类白血病细胞有杀伤作用 。在哺乳动物细胞，Caspase以依赖线粒体和非依赖线粒体两条途径促进细胞凋亡，Caspase8和Caspase3在其中起重要作用。前者是细胞凋亡的启动者，被激活后可引起下游Caspase“瀑布式”激活 ，且可将凋亡信号从非依赖线粒体途径传递到线粒体途径，把死亡受体通路和线粒体通路联系起来，放大凋亡信号 ；后者是线粒体一细胞色素C途径、死亡配体／受体途径、颗粒酶B途径的共同通路 ，是细胞凋亡的主要效应因子。本实验结果显示，PSO对HL一6O细胞Caspase8蛋白的影响微弱，两个浓度组问作用差异无统计学意义；UVA、PUVA使Caspase8蛋白表达增强，作用强度在8 h达峰，但后者的作用显著强于UVA(P<0．05)。PSO、UVA、PUVA均使HL一60细胞Caspase3蛋白表达增强，作用4 h起效，8 h达峰，随着PSO浓度增大，作用时间延长，表达强度增强，且PUVA的作用显著强于PSO 及UVA(P<0．05)。从结果中我们还发现，PUVA 对Caspase8、Caspase3蛋白表达产生影响的时间分别为作用8 h和4 h。理论上，前者是凋亡的启动者，后者是凋亡的执行者，对前者产生影响的时间应该在后者之前，这样的结果或许是因为两者从基因水平转录至蛋白水平所需时间的不同所致。
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